For example, one may proceed by site-directed mutagenesis or PCR techniques in order to delete or substitute one or more amino acid(s) within an active region of the enzymatic activity (for example in the catalytic site) such that the native enzymatic activity is significantly reduced or abolished.
Por exemplo, pode-se proceder com a mutagênese direcionada ao sítio ou técnicas PCR de modo a deletar ou substituir um ou mais aminoácidos dentro de uma região ativa da atividade enzimática (por exemplo, no sítio catalítico), de modo que a atividade enzimática nativa seja reduzida ou abolida significativamente.
Banco de Glossários (traduções não verificadas)
Área
Inglês
Português
Qualidade
Téc/Geral
site-directed mutagenesis
mutagênese locodirigida-mutagênese dirigida ao sítio
For example, one may proceed by site-directed mutagenesis or PCR techniques in order to delete or substitute one or more amino acid(s) within an active region of the enzymatic activity (for example in the catalytic site) such that the native enzymatic activity is significantly reduced or abolished.
Por exemplo, pode-se proceder com a mutagênese direcionada ao sítio ou técnicas PCR de modo a deletar ou substituir um ou mais aminoácidos dentro de uma região ativa da atividade enzimática (por exemplo, no sítio catalítico), de modo que a atividade enzimática nativa seja reduzida ou abolida significativamente.
For example the nucleotide sequence encoding the NS polypeptide can be modified using routine recombinant techniques, such as enzymatic cutting followed by modification and ligation of defined fragment, site-directed mutagenesis (for example using the Sculptor™ in vitro mutagenesis system of Amersham, Les Ullis, France), PCR mutagenesis or DNA shuffling.
Por exemplo, a seqüência de nucleotídeos codificando o polipeptídeo NS pode ser modificada usando técnicas recombinantes de rotina, tal como corte enzimático seguido de modificação e ligação do fragmento definido, mutagênese direcionada ao sítio (por exemplo, usando o sistema de mutagênese in vitro SulptorTM da Amersham, Les Ullis, France), mutagênese do DNA ou embaralhamento do DNA
For example the nucleotide sequence encoding the NS polypeptide can be modified using routine recombinant techniques, such as enzymatic cutting followed by modification and ligation of defined fragment, site-directed mutagenesis (for example using the Sculptor™ in vitro mutagenesis system of Amersham, Les Ullis, France), PCR mutagenesis or DNA shuffling.
Por exemplo, a seqüência de nucleotídeos codificando o polipeptídeo NS pode ser modificada usando técnicas recombinantes de rotina, tal como corte enzimático seguido de modificação e ligação do fragmento definido, mutagênese direcionada ao sítio (por exemplo, usando o sistema de mutagênese in vitro SulptorTM da Amersham, Les Ullis, France), mutagênese do DNA ou embaralhamento do DNA
To initiate the characterization of one of these ORFs, in this module, the strategies of site-directed mutagenesis by overlap extension PCR and molecular modeling were used.
Para iniciar a caracterização de uma destas ORFs foram utilizadas, neste estudo, as estratégias de mutação sítio-dirigida de PCR por sobreposição e extensão e modelagem molecular.
Mutants of these residues were generated by site-directed mutagenesis to evaluate such interactions according to the product formed heterologously by the mutants expressed in Saccharomyces cerevisiae.
Os mutantes destes resíduos foram então gerados por mutagênese sítiodirigida para avaliar tais interações de acordo com o produto formado heterologamente pelos mutantes expressos em Saccharomyces cerevisiae.
Site-directed mutagenesis studies revealed the structural importance of this tyrosine residue in determining a stable protein conformation .
For example, one may proceed by site-directed mutagenesis or PCR techniques in order to delete or substitute one or more amino acid(s) within an active region of the enzymatic activity (for example in the catalytic site) such that the native enzymatic activity is significantly reduced or abolished.
Por exemplo, pode-se proceder com a mutagênese direcionada ao sítio ou técnicas PCR de modo a deletar ou substituir um ou mais aminoácidos dentro de uma região ativa da atividade enzimática (por exemplo, no sítio catalítico), de modo que a atividade enzimática nativa seja reduzida ou abolida significativamente.
Therefore, the aim of this study was to investigate the impact of the ntrB and ntrC genes on the development of citrus canker in rangpur lime (Citrus limonia Osbeck), as well as the possible relation of ntrB and ntrC genes with the regulation of the type 3 secretion system (T3SS) gene expression, which is considered one of the main virulence factors of XccA. The ΔntrB and ΔntrC were obtained by site-directed mutagenesis through overlap extension polymerase chain reaction.
Este estudo teve como objetivo investigar os efeitos dos genes ntrB e ntrC no desenvolvimento do cancro cítrico em limão-cravo (Citrus limonia Osbeck), bem como a possível relação desses genes com a regulação da expressão de genes do sistema de secreção tipo 3 (SST3), considerado um dos principais fatores de virulência da XccA. Os mutantes ΔntrB e ΔntrC foram obtidos pela técnica de mutagênese sítio-dirigida por reação em cadeia da polimerase de extensão por sobreposição.
...ed from Rangpur lime leaves collected at 48, 72 and 1,0 h after inoculation compared to Xac growing in NA culture. For the production of Xac double mutant having the ExsF and exsG genes silenced, the site-directed mutagenesis technique by PCR using the suicide vector pOK1 was used. For the production of ExsF and ExsG recombinant proteins, the E. coli heterologous expression in the pET SUMO expression vector was use...
... onde foi avaliada a expressão dos mesmos em Xac inoculada em folhas de limoeiro cravo coletadas em três tempos após a inoculação (48, 72 e 1,0 h) comparada com a expressão em Xac inoculada em meio de cultura. Já para a produção do mutante duplo de Xac apresentando os genes exsF e exsG nocauteados, foi utilizada a técnica de mutação sítio-dirigida por PCR utilizando o vetor suicida pOK1 e a estratégia de troca alélica. Para a produção das proteínas ExsF e ExsG recombinantes foi utilizada a expressão h...
...ofile of A. hydrophila ATCC 79,6 and Embrapa 0,9 wild-type strains, and acyl homoserine lactones (AHLs)-deficient mutant were compared. A. hydrophila QS mutants were constructed using a site-directed mutagenesis strategy. The ahyI gene was interrupted by gentamicin 3-acetyltransferase gene using the suicide vector pKNG1,1. Mutant bacteria 029,8, 029,14 and 029,21 showed the quorum sensing system compromised ...
...otéico das estirpes selvagens Embrapa 0,9 e ATCC 79,6 de A. hydrophila mutantes incapazes de sintetizar homoserina lactonas aciladas (AHLs), moléculas sinal do sistema quorum sensing. Os mutantes de A. hydrophila foram construídos utilizando a estratégia de mutação sítio dirigida, pela interrupção do gene ahyI com o gene que codifica gentamicina-3-acetiltransferase, utilizando o vetor suicida pKNG1,1. Os mutantes 029,8, 029,14 e 029,21, comprovadamente apresentaram o sistema quorum sensing comprom...
...Rangpur lime (Citrus limonia Osbek) and sweet orange 'Pêra Rio' (Citrus sinensis (L.) Osbeck) compared with the wild isolate strain Xac 3,6. The technique used for obtaining the mutant was PCR-based site-directed mutagenesis using the suicide vector POK1, followed by homologous recombination. Pathogenicity tests of the mutant ΔXAC10,8 showed that the mutation affected the color and shape of colonies, and prevent multipl...
...F e avaliação da sua patogenicidade quando comparada com a do isolado 3,6 de Xac selvagem em plantas de limão 'Cravo' (Citrus limonia Osbek) e laranja Pêra (Citrus sinensis (L.) Osbeck). A técnica utilizada para a obtenção do mutante foi a da mutagênese sítio-dirigida por PCR utilizando o vetor suicida pOK1, seguida de recombinação homóloga. Os ensaios de patogenicidade do mutante ΔXAC10,8 mostraram que a mutação alterou a coloração e o formato das colônias e impediu a multiplicação da bactéria in p...
... were selected to serve as serological marker candidates in each of the following PRRSV proteins: Nsp2, GP3 and M. These epitopes were deleted in the wild-type cDNA infectious clone (FL-12) by site-directed mutagenesis. The results of this study are presented in the second part of this thesis. A Nsp2 mutant virus (FLdNsp2,44) was successfully rescued following RNA transfection in MARC 1,5 cells. This epitope deleti...
... Nsp2, Gp3 e M. Esses epítopos foram então deletados em um clone infeccioso de cDNA (FL12) por mutagênese sítio-direcionada. Os resultados desses experimentos encontram-se descritos na segunda parte da tese. Um vírus mutante carreando a deleção de um epítopo imunodominante da Nsp2 (FLdNsp2,44) foi obtido após transfeccção de RNA viral em células MARC1,5. A caracterização in vitro e in vivo do vírus mutante demonstrou que a remoção dos 15 aa da Nsp2 não produziu efeito sobre a imunogenicidade, re...
... the M23 Peptidase domain, whose biological process is predicted to act as cell wall hydrolase, but the actual function of these proteins in Xac is still unknown. This work aimed to evaluate, through site-directed mutagenesis. whether XAC23,1 and XAC38,8 ORFs are related to the virulence and / or pathogenicity of Xac3,6 and the development of citrus canker. In order to observe phenotypic changes, in vitro and in planta te...
...de parede celular, mas a real função destas proteínas em Xac ainda é desconhecida. Este trabalho teve como objetivo avaliar, por meio da mutação sítio-dirigida, se as ORFs XAC23,1 e XAC38,8 estão relacionadas com a virulência e/ou patogenicidade de X. citri subsp. citri 3,6 e com o desenvolvimento do cancro cítrico. Para isso, foram realizados testes in vitro e in planta dos mutantes obtidos, visando observar alterações fenotípicas. Devido a presença de peptídeo sinal, a ORF XAC23,1 foi fundida à ...
... putative domains, including peptidase M23 domain. It is hypothesized that this protein may be involved in the pathogenicity and / or virulence of the bacterium. For the ΔXAC00,4 mutant was used for site-directed mutagenesis technique, followed by homologous recombination with the suicide vector pOK1. The ΔXAC00,4 mutant was analyzed in relation to pathogenicity characteristics, growth in vivo and in vitro, self-aggrega...
... é que esta proteína pode estar envolvida com a patogenicidade e/ou virulência da bactéria. Para obter o mutante ΔXAC00,4 foi utilizada a técnica de mutagênese sítio-dirigida, seguida de recombinação homóloga com o vetor suicida pOK1. O mutante ΔXAC00,4 foi analisado em relação às características de patogenicidade, crescimento in vivo e in vitro, capacidade de autoagregação, produção de biofilme e produção de goma xantana. O teste de patogenicidade e a curva de crescimento in vivo foram realizados ...
...present in the gsn promoter. Binding specificity was confirmed by competition assays using an oligonucleotide containing the DNA motif and by binding to a DNA fragment containing the motif mutated by site-directed mutagenesis... ...
...8). A análise de ligação DNA-proteína mostrou que a proteína PACC de N. crassa recombinante produzida em E. coli foi capaz de se ligar ao motif de DNA para a proteína PACC, presente na região promotora do gene gsn......
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